Lai cīnītos ar vīrusu izraisītajām slimībām ir nepieciešams radīt pretvīrusu vakcīnas, kas organismā izsauktu imūnreakciju. Viens no moderno vakcīnu veidiem ir himeras vakcīnas – infekciju neizraisoši vīrusi vai nukleīnskābi nesaturošas vīrusiem līdzīgas daļiņas (VLP), kas uz sava kapsīda nes sveša vīrusa antigēnus.
Mana kursa darba mērķis ir dziļāk apgūt gēnu inženierijas metodes, kā arī veikt eksperimentus viendīgļlapju vīrusa cDNS vektora radīšanai, kas tiktu balstīts uz viendīgļlapju vīrusu, kurš nākotnē būtu piemērots jaunu himēru augu vīrusu – vakcīnu kandidātu radīšanai.
Kursa darbs tika izstrādāts no 2002. gada februāra līdz 2002. gada septembrim Latvijas Universitātes Biomedicīnas pētījumu un studiju centrā projekta “Augu sobmeovīrusu vektori himēru vakcīnu konstruēšanai” (Nr. 01.0223) ietvaros Andra Zeltiņa vadībā. Laboratorijā tiek veikti pētījumi himeru vakcīnu iegūšanai no augiem, vīrusiem līdzīgu daļiņu veidošanās mikroorganismos, kā pētījumu modeli izmantojot kamolzāles raibumu vīrusu (CfMV) un rīsu dzelteno raibumu vīrusu (RYMV).
Darba gaitā, tai skaitā bakalaura darba ietvaros, tiks izveidotas vairākas cDNS vektoru konstrukcijas, tiks pārbaudīta to spēja inficēt auzas. Ja kāda no veidotajām konstrukcijām izrādīsies veiksmīga, tad to izmantos uz augu vīrusa balstītu vakcīnu kandidātu iegūšanai.
Manā darbā tika iegūts auga vīrusa vektora kandidāts, kas satur divus 35S promotorus un kamolzāles raibuma vīrusa (CfMV) cDNS.
Lai klonētu 35S promotora sekvences pirms CfMV cDNS, ar PCR mutaģenēzes palīdzību tieši pirms cDNS tika ievadīts piemērots restrikcijas saits.
Tika izmantotas divas stratēģijas, lai veidotu cDNS saturošu vektoru. Pirmā konstrukcija tika veidota subklonējot CfMV cDNS vektorā, kas satur divus 35S promotorus. Diemžēl šī konstrukcija bija strukturāli nestabila. Tāpēc šī iemesla dēļ tika veidota līdzīga konstrukcija, bet citādākā veidā – 35S promotors tika subklonēts plazmīdā, kura saturēja CfMV cDNS. Šai konstrukcijai netika novērota strukturālā nestabilitāte, ko apliecina restrikcijas analīžu eksperimenti.
Šis CfMV cDNS vektors tiks izmantots augu eksperimentos, kā arī manā tālākajā darbībā.