Kursa darbs par Nucb2

Kopsavilkums

Summary

Ievads

1. Literatūras apskats

1.2. Ģenētiskās un epiģenētiskās izmaiņas

1.3. Kas zināms par NUCB2?

2. Materiāli un metodes
2.1. Materiāli
2.1.1. Reaktīvi

2.1.2 Sintētiskie oligonukleotīdi

2.1.3. Materiāli

2.1.4. Audu paraugi

2.1.5. Aparatūra

2.2.1. DNS izdalīšana no audiem ar TRIzol reaģentu

2.2.2. PCR (polymerase chain reaction) – polimerāzes ķēdes reakcija

2.2.3. PCR produktu elektroforēze agarozes gelā

2.2.4.PCR produktu aptuvenā garuma un daudzuma noteikšana

2.2.5. PCR produktu attīrīšana

2.2.6. Automātiskā sekvenēšana

2.2.7. Sekvenču analīze

2.2.8. DNS modificēšana ar Na- bisulfītu

2.2.9. Divpakāpju PCR

2.2.9.1. Divpakāpju PCR reakcijas maisījums un programma.

2.2.9.2. Reakcijas apstākļu optimizēšana ar Na-bisulfītu modificētās DNS sekvenēšanai

2.2.9.3. Sekvenēšanas reakcijas attīrīšana ar Na-bisulfītu modificētās DNS sekvenēšanai:

2.3. Darba drošības tehnika

3. Rezultāti un diskusija
3.1. NUCB2 mRNS ekspresijas analīze un promotera rajona identificēšana ar 5` RLM-RACE

3.2. Identificētā NUCB2 promotera rajona DNS sekvences analīze

3.4. Metodes izstrādāšana CpG metilēšanas noteikšanai

3.4.1. Ar Na- bisulfītu modificētas DNS sekvenēšanas reakcijas optimizēšana

4. Secinājumi

5. Pateicības

6. Literatūras saraksts