Materiāli

E.coli darbā izmantotie baktēriju celmi

RR1: F- , hsdS20, (rB- , mB- ), supE44, ara-14, proA2, rpsL20 (strr), lacY1, galK2, xyl-5, mtl-1, supE44.

K802:  F-, lacY1 or D(lac) 6, supE44, galK2, galT22, mcrA, rfbD1, metB1, mcrB1, hsdR17 (rk-, mk+).

BL21: F-, ompT, hsdS(r-B, m-B), gal, dcm

Agarizētā LB barotne, g/l

LB barotnei pirms autoklavēšanas pievieno bakto-agaru 15 g/l. Tad atdzesē līdz 50 °C un izlej Petri platēs pa 20 ml.

Mg2+/DN-āzes šķīdums:

·        1M MgCl2

·        DN-āze, 2 mg/ml

Fermenti

Restrikcijas endonukleāzes: Xba I, Kpn 2I, Cfr 9I, Sal I.

Taq DNS polimerāze , T4 fāga DNS ligāze , T7 fāga DNS polimerāze.

Visi darbā izmantotie fermenti ražoti firmā "MBI Fermentas" (Lietuva).

Praimeri

8.46, 9.196, Kpn21 reverse.

Reaģenti

Agaroze Ultra-PURE (Gibco BRL, Skotija), etilēndiamīntetraacetāts (EDTA), Tris (hidroksilmetil-aminometāns), 95% etanols, etīdija bromīds 10mg/ml (Pharmaticia Biotech, Zviedrija), 10mM dNTP (MBI Fermentas, Lietuva), magnija hlorīds (MBI Fermentas, Lietuva), DNS ekstrakcijas komplekts (DNS Extraction Kit) (MBI Fermentas, Lietuva), Big Dye terminatoru PCR sevenēšanas komplekts (Big Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit) (Applied Biosystems, ASV), Nātrija dodecilsulfāts (SDS), Tween 20 (Serva), nātrija hidroksīds, etiķskābe, PBS, nātrija hlorīds, sālsskābe, 95% metanols, hloroforms, izopropanols (Реахим), DNS Ligēšanas komplekts (DNA Ligation Kit) (MBI Fermentas),

Aparatūra

·        Sausais termostats THERMO-BLOCK TDB-120 (Biosan Sci, Latvija);

·        DNS amplifikātors PTC-200 DNA Engine Peltier Thermal Cycler (MJ Research, ASV);

·        DNS amplifikātors GeneAmpâ PCR system 9700 (Applied Biosystems, ASV);

·        Barošanas bloks - Electrophoresis power supply EPS 500/400 (Pharmacia Fine Chemicals, Zviedrija);

·        Horizontālais elektroforēzes aparāts GNA 100 (Pharmacia Biotech, Zviedrija);

·        Centrifūga Eppendorf 5417 R (Vācija);

·        Vortekss F/S VEF-BIOSAN (Biosan, Latvija);

·        Vortekss/centrifūga FL-2400 (Biosan, Latvija);

·        Transluminatorā UVP fotoiekārta (C-80 Epi-Illumination UV Drakroom  Lielbritānija).

 

Guntars, lapa pēdējo reizi labota 22-01-2008 09:33