2.posms: piesātina ar siltu parafīnu pakāpeniski parafīns ieiet visās šūnās un audos. Pēc tam materiālu liek aukstumā, lai sacietē.
3.posms: preparātus griež mikrometros (5μm) vai nanometros (60-80nm). Parafīna griezumus veido ar speciālu aparātu mikrotomu. No tā naža griezumus noņem un uzliek uz tīra priekšmetstikliņa, griezumi tiek piestiprināti.
4.posms: griezumu krāsošana vispopulārākās 2 krāsas hematoksilīns (zilgans, violets), ar ko var nokrāsot šūnas kodola hromatīnu (heterohromatīnu), un eozīns (maigi rozā, sarkans) krāso citolemmu, citoplazmu. Sen novērots, ka vienai daļai struktūru ir tieksme uzņemt bāzisku krāsu bazofīlija. Ir INTRA un EKSTRA celulāra bazofīlija gan pašā šūnā, gan ārpus tās ir struktūras, kas uzņem bāziskas krāsas. INTRA šūnas kodols, kodoliņš (jo nukleīnskābes satur fosfatgrupas), ribosomas (krāsa saistās ar nukleīnskābes sastāvdaļām). EKSTRA celulāra bazofīlija raksturīga skrimšļaudiem. Tieksme krāsoties ar skābām krāsām acidofīlija (oksifīlija). Arī acidofīlija var būt INTRA (plazmatiskā membrāna, citoplazma, un EKSTRA celulāra (šķiedras saistaudos).
5.posms: uzliek segstikliņu, lai ilgi saglabātu, ieslēdz preparātu caurspīdīgā vidē.
Par šūnām nevar teikt, ka tās ir beigtas, jāsaka: fiksētas. Bet analizēt var arī dzīvas šūnas, tad izmanto barotnes, un metodi sauc audu un šūnu kultūras. Tad var novērot norises šūnās.
Imunohistoķīmijā, izmantojot dārgus speciālus marķierus, var noteikt pat atsevišķu molekulu lokalizāciju. Atsevišķos gadījumos izmanto arī daudz lielākus palielinājumus.
Histoloģiskos preparātus var pētīt ar:
- gaismas mikroskopu,
- elektronmikroskopu,
- ultravioletās gaismas mikroskopu,
- luminiscences, fluorescences mikroskopu,
- tumšā redzes lauka mikroskopiju (dzīvas šūnas),
- kontrastfāžu mikroskopiju,
- radioloģiskajām metodēm.
Mikrotoms
http://www.directindustry.de/prod/micros-produktions-
handels-gmbh/mikrotom-55982-372078.html
Fiksēts paraugs pirms griešanas ar
mikrotomu
www.merritt.edu/Projects/40733/biosci110.ppt
Hematoksilīna krāsa un ar to nokrāsots paraugs
http://www.polysciences.com/Catalog/Department/
Product/98/productId__1717/categoryId__203/
Fluorescentās mikroskopijas paraugs
www.freewebs.com/