1.posms: audu materiāla
fiksācija. Mērķis ir saglabāt objektu,
lai tas nebūtu sabojāts. Izmanto 10% formalīnu. Minimālais fiksācijas
laiks 1 2h, bet formalīnā objektu var atstāt gadiem, ar laiku
objekts sarūk, samazinot tilpumu.
2.posms: piesātina ar siltu parafīnu pakāpeniski parafīns
ieiet visās šūnās un audos. Pēc tam materiālu liek aukstumā, lai
sacietē.
3.posms: preparātus griež mikrometros (5μm) vai nanometros (60-80nm).
Parafīna griezumus veido ar speciālu
aparātu mikrotomu. No tā naža griezumus noņem un uzliek uz tīra
priekšmetstikliņa, griezumi tiek piestiprināti.
4.posms: griezumu krāsošana vispopulārākās 2 krāsas hematoksilīns
(zilgans, violets), ar ko var nokrāsot šūnas kodola
hromatīnu (heterohromatīnu), un eozīns (maigi rozā, sarkans) krāso
citolemmu, citoplazmu. Sen novērots, ka vienai daļai struktūru ir
tieksme uzņemt bāzisku krāsu bazofīlija. Ir INTRA un EKSTRA celulāra
bazofīlija gan pašā šūnā, gan ārpus tās ir struktūras, kas uzņem
bāziskas krāsas. INTRA šūnas kodols, kodoliņš (jo nukleīnskābes satur
fosfatgrupas), ribosomas (krāsa saistās ar nukleīnskābes sastāvdaļām).
EKSTRA celulāra bazofīlija raksturīga skrimšļaudiem. Tieksme krāsoties
ar skābām krāsām acidofīlija (oksifīlija). Arī acidofīlija var būt
INTRA (plazmatiskā membrāna, citoplazma, un EKSTRA celulāra (šķiedras
saistaudos).
5.posms: uzliek segstikliņu, lai ilgi saglabātu, ieslēdz preparātu
caurspīdīgā vidē.
Par šūnām nevar teikt, ka tās ir beigtas, jāsaka:
fiksētas. Bet
analizēt var arī dzīvas šūnas, tad izmanto barotnes, un metodi sauc
audu un šūnu kultūras. Tad var novērot norises šūnās.
Imunohistoķīmijā, izmantojot dārgus speciālus marķierus,
var
noteikt pat atsevišķu molekulu lokalizāciju. Atsevišķos gadījumos
izmanto arī daudz lielākus palielinājumus.
Histoloģiskos preparātus var pētīt ar:
- gaismas mikroskopu,
- elektronmikroskopu,
- ultravioletās gaismas mikroskopu,
- luminiscences, fluorescences mikroskopu,
- tumšā redzes lauka mikroskopiju (dzīvas šūnas),
- kontrastfāžu mikroskopiju,
- radioloģiskajām metodēm.
|
Mikrotoms
http://www.directindustry.de/prod/micros-produktions-
handels-gmbh/mikrotom-55982-372078.html
Fiksēts paraugs pirms griešanas ar
mikrotomu
www.merritt.edu/Projects/40733/biosci110.ppt
Hematoksilīna krāsa un ar to nokrāsots paraugs
http://www.polysciences.com/Catalog/Department/
Product/98/productId__1717/categoryId__203/
Fluorescentās mikroskopijas paraugs
www.freewebs.com/bnip1/segmentation.htm
|